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液氮冷凍研磨機(jī)提取RNA步驟探討

更新時(shí)間：2020-05-22 點(diǎn)擊次數(shù)：2888

　　液氮冷凍研磨機(jī)采用電磁撞子研磨技術(shù)，將裝有樣品的密閉容器浸入液氮，在超低溫環(huán)境下，利用電磁驅(qū)動(dòng)鋼制撞子往復(fù)撞擊樣品，快速*地粉碎樣品。*的研磨方式相比傳統(tǒng)研磨，研磨時(shí)間更短，研磨樣品更為精細(xì)。

　　液氮冷凍研磨機(jī)的設(shè)計(jì)人性化、安全高效、耐用、操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好、避免樣品間的交叉污染，適應(yīng)不同客戶(hù)的各種需求，是*的“研磨手段”，廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、動(dòng)植物、醫(yī)學(xué)、礦物學(xué)、材料科學(xué)等領(lǐng)域。

　　液氮冷凍研磨提取RNA該如何進(jìn)行？一起來(lái)看看：

　　1.用75%酒精對(duì)實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)、移液槍、槍頭盒、管架進(jìn)行消毒，然后再用RNase Zap擦拭上述材料。

　　2.取出-80℃冰箱保存的組織塊，放于用液氮預(yù)冷過(guò)的研缽中，敲碎一小塊組織，其余放回凍存管。

　　3.加入液氮，先輕輕敲碎組織到小塊，再研磨成粉末，直到看不到組織塊。

　　4.加入液氮使粉末凝聚成團(tuán)，馬上用藥勺把粉末轉(zhuǎn)移到2.0ml EP管中。

　　5.待液氮揮發(fā)干后，加入1ml Trizol裂解液，用1ml移液器將細(xì)胞吹散開(kāi)，保證細(xì)胞裂解充分，必要時(shí)可借助水平振蕩器混勻。

　　6.4℃離心機(jī)12000rpm離心5分鐘，棄沉淀。

　　7.加入CHCl3，比例200ul CHCl3/ml Trizol，顛倒混勻，室溫放置15分鐘。

　　8.于4℃離心機(jī)12000g離心15分鐘。取上清液，注意吸取上清是無(wú)觸碰到中間層或下層。

　　9.取上清液，注意吸取上清是無(wú)觸碰到中間層或下層。

　　10.加入等體積異丙醇，-20℃沉淀1小時(shí)。

　　11.于4℃離心機(jī)12000g離心10分鐘。